印跡法(blotting)即轉移電泳，是20世紀70年代發(fā)展起來的一種新方法。Southern于1975年建立了檢測特異DNA片段的DNA- RNA雜交法，稱作Southern印跡法。1977年Alwine等把此方法應用到RNA的研究方面，稱作Nouthern印跡法。1979年Towbin等則把該方法擴展應用到蛋白質分析方面，稱作Western印跡法。1982年 Reinhart報道的雙向蛋白質印跡法，稱作Eastern印跡法。目前，有人把Southern，Nouthern，Western印跡法分別稱作DNA印跡法，RNA印跡法和蛋白質印跡法。而每一種印跡法又可以分為斑點印跡法和電泳轉移印跡法。前者是將樣品直接吸附于固相載體上，而后者則是將樣品先經(jīng)過電泳后在轉移到固相載體表面上，其余操作基本相同。由于核酸和蛋白質等大分子物質印跡到固相載體，容易和各種探針發(fā)生化學或免疫反應，因而對檢測樣品(尤其是粗樣品)中某些組分的理化性質是有益的。其操作過程所需的試劑量少，靈敏度高，所以應用較為普遍。
印跡法的基本原理
(一)概念
1．探針 用化學方法將有識別能力的物質(如抗原、激素、核酸等)和酶(如辣根過氧化物酶)或核素(如3H、35S、32P)，或熒光物質(如異硫氰熒光素、地gao辛等)結合成的復合物稱作探針。
2．固相載體 即用于吸附生命大分子物質的固體材料。這類材料有硝酸纖維素(nitrocellulose，NC)膜，尼龍膜(nylon- membranes，NDM)，重氮芐氧甲基(yloxymethyl，DBM)膜和重氮芐硫醚(diazophenylthiaether，DPT)紙等。最chang用的是孔徑為0．45／lm的NC膜，因為它成本低廉，結合力強，背景較清晰。而對于檢測核酸和酸性蛋白質來說，理想載體是帶正電的尼龍膜，它與負電荷物質結合力很強，操作亦簡單。但因為其與負離子型染料也易結合，背景值高，故使用受到一些限制。
3．封阻 用一種與待測物不反應的物質(如蛋白質、核酸、吐溫20等)封阻載體印跡區(qū)域以外的剩余吸附位點，使探針與印跡物反應，且不吸附到載體上，此過程稱為封阻，從而使印跡結果背景干凈，印跡的斑點或譜帶更為清晰。
4．印跡 把經(jīng)過凝膠電泳后的組分，通過吸附或電泳方法轉移或者以直接點樣方式吸附到固相載體上，此過程稱電泳印跡，或稱點印跡。
5．放射自顯影 將含放射性核素的復合物置X線感光膠片上壓片，當放射性核素電離輻射時，膠片上會發(fā)生化學“感光"作用，隨后經(jīng)顯影，定影，即可呈現(xiàn)出斑點或譜帶，此法較靈敏。
(二)原理
生命大分子物質(如核酸或蛋白質)印跡到固相載體上，經(jīng)淬滅試劑處理后，可與相應的探針(酶標記)反應，接著用適當?shù)娜芤浩矗煤孜锏娜芤褐酗@色，即可現(xiàn)出譜帶。如所用探針為放射性核素標記物時，則應將漂洗后的載體進行放射自顯影，即可檢測出樣品中特異的成分。
印跡法的應用
(一)分析和制備特異成分一般生命大分子如蛋白質等的粗制品經(jīng)過凝膠電泳后，常常產(chǎn)生許多譜帶。但它再經(jīng)印跡轉移程序分析后，就可以從中找出所需的某一特殊成分，而這種特殊成分又可以從相應的凝膠區(qū)段回收。用此方法得到的物質純度較高，純化步驟也較簡單。
(二)檢測生命大分子之間的相互作用
不同生命大分子之間的相互作用是經(jīng)常發(fā)生的，特別是在有機體內。因此，建立一種檢測生命大分子物質之間相互作用的有效方法一直是人們研究的重要課題。而用印跡法就可以檢測出如DNA-RNA、DNA-蛋白質、RNA-蛋白質、酶—底物、糖蛋白—凝集素、激素—受體等物質之間的相互作用，同時也可用此方法尋找各種大分子物質的相應配體。
