ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)技巧！

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1. 標(biāo)本及采集、貯運(yùn)因素

   ① 嚴(yán)重溶血：以HRP為標(biāo)記的ELISA測(cè)定中，殘留在孔內(nèi)的血紅蛋白具有過(guò)氧化物酶樣活性，催化底物顯色造成假陽(yáng)性；

   ② 混有紅細(xì)胞的血清易沉淀或附著在聚乙烯孔內(nèi)不易洗凈

   ③ 如有細(xì)菌污染，菌體中可能含有內(nèi)源性HRP，也會(huì)產(chǎn)生假陽(yáng)性反應(yīng)；

   ④ 標(biāo)本凝固不全，有時(shí)為了爭(zhēng)取時(shí)間快速檢測(cè)，常在血液還未開始凝固時(shí)即強(qiáng)行離心分離血清，使血清中仍殘留部分纖維蛋白原，在ELISA測(cè)定過(guò)程中可以形成肉眼可見(jiàn)的纖維蛋白塊，易造成假陽(yáng)性結(jié)果；

   ⑤ 采血試管洗滌不*、反復(fù)使用易交叉污染

   ⑥ 塑料試管能吸附抗原物質(zhì) ，樣本久置在塑料管內(nèi)會(huì)使樣本內(nèi)抗原含量下降造成假陰性。

    血清標(biāo)本宜在新鮮時(shí)檢測(cè)，嚴(yán)重溶血標(biāo)本禁用。一般說(shuō)來(lái)，在5天內(nèi)測(cè)定的血清標(biāo)本可放置于4℃，標(biāo)本在冰箱中保存時(shí)間過(guò)長(zhǎng)導(dǎo)致血清IgG 聚合，使間接法的 試劑 本底加深。超過(guò)一周測(cè)定的需-20℃保存。凍結(jié)血清融解后，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應(yīng)充分混勻并避免產(chǎn)生氣泡?；鞚峄蛴谐恋淼难鍢?biāo)本應(yīng)先離心或過(guò)濾，澄清后再檢測(cè)。反復(fù)凍融會(huì)使 抗體 效價(jià)跌落，所以測(cè) 抗體 的血清標(biāo)本如需保存作多次檢測(cè)，宜少量分裝冰存。

2. 之操作技術(shù)的影響

   ① 應(yīng)保證清潔，整個(gè)操作過(guò)程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸。以上的措施可以使“花板”降至限度。從而提高檢測(cè)的特異性。并得到更準(zhǔn)確、可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

   ② 合理安排檢測(cè)量，以免反應(yīng)板過(guò)多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。

   ③ 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。

   ④ 用洗板機(jī)洗板時(shí)，保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙（選擇干凈、無(wú)或少塵的吸水材料）上輕輕拍干：還要防止針口有纖維蛋白或異物，這些異物在洗板的過(guò)程中易產(chǎn)生拖帶現(xiàn)象而導(dǎo)致“花板”的出現(xiàn)。

   ⑤ 顯色劑盡量在臨用前配制，堅(jiān)持不用過(guò)期顯色劑，肉眼可見(jiàn)淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用。