如何選擇到適合自己實(shí)驗(yàn)的抗體

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    抗體

    一、關(guān)于特異性的選擇：特異性的選擇主要需要考慮四個(gè)方面：蛋白特異性、種屬特異性、實(shí)驗(yàn)方法特異性、標(biāo)記物的特異性。

    1、蛋白特異性：針對(duì)需要檢測(cè)的蛋白查找抗體，幾個(gè)細(xì)節(jié)要區(qū)分，重組表達(dá)的蛋白和內(nèi)源性蛋白的檢測(cè)，對(duì)抗體的要求是不一樣的，注意查看抗體說(shuō)明書(shū)的檢測(cè)說(shuō)明。如果重組蛋白不是全長(zhǎng)表達(dá)，則需要注意抗體的免疫原區(qū)域是否在重組蛋白區(qū)域內(nèi)。內(nèi)源性蛋白能清楚其剪切與修飾的方式，特殊表型的蛋白需要進(jìn)行序列比對(duì)，并結(jié)合抗體免疫原序列，查看交叉反應(yīng)的情況。磷酸化蛋白檢測(cè)需要確定具體位點(diǎn)，不同位點(diǎn)的磷酸化意味著可能有不同的機(jī)制存在，不宜一概而論。

    2、種屬特異性：同種蛋白不同物種，有著或大或小的差異。目前大部分商品化抗體都是以人源蛋白序列為模板重組蛋白或設(shè)計(jì)多肽抗原的，根據(jù)蛋白的同源性的情況與其他種屬發(fā)生交叉反應(yīng)。需要參照說(shuō)明書(shū)注明的可反應(yīng)種屬信息。一些稀有種屬很難找到抗體，可以通過(guò)蛋白的序列比對(duì)，選擇同源序列免疫的抗體，不過(guò)一般這種情況生產(chǎn)商不會(huì)受理其關(guān)于質(zhì)量的申訴，如果可以申請(qǐng)到免費(fèi)的抗體樣品，則利于抗體選擇。

    3、實(shí)驗(yàn)方法特異性：目前使用抗體的實(shí)驗(yàn)方法有很多，不同的使用方法過(guò)程中，因?yàn)閷?duì)蛋白樣品的處理方式不一樣，蛋白的含量有差異，對(duì)抗體的識(shí)別表位和效價(jià)要求都是不一樣的。具體的根據(jù)說(shuō)明書(shū)注明的產(chǎn)品應(yīng)用方法進(jìn)行選擇。但是生產(chǎn)商一般不會(huì)將每個(gè)抗體都進(jìn)行各種實(shí)驗(yàn)的檢測(cè)，目前檢測(cè)比較多的只是WB、IHC、IF等，如果針對(duì)具體的實(shí)驗(yàn)方法沒(méi)有找到合適的抗體的，可以結(jié)合蛋白序列分析和抗體的抗原信息，選擇盡可能有效果的抗體。同樣，申請(qǐng)到免費(fèi)的抗體樣品是個(gè)很好的途徑。

    4、標(biāo)記物的特異性一般基于實(shí)驗(yàn)操作的實(shí)驗(yàn)方法不會(huì)使用帶有標(biāo)記的一抗，比如WB、IHC等，都是通過(guò)二抗類(lèi)的試劑標(biāo)記達(dá)到結(jié)果呈現(xiàn)的目的。但是基于儀器分析的一些實(shí)驗(yàn)，可能就會(huì)使用到直接標(biāo)記的一抗，比如流式實(shí)驗(yàn)。那么需要了解到自己將要使用的儀器能檢測(cè)到的熒光范圍，不通的參數(shù)要求選擇對(duì)應(yīng)的標(biāo)記物。在免疫熒光雙標(biāo)實(shí)驗(yàn)中，需要選配不同的熒光物。

    二、抗體種屬來(lái)源的選擇：有人認(rèn)為單抗比多抗好，其實(shí)這并不是一個(gè)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)挠^點(diǎn)，只能說(shuō)在可能性上單抗的特異性更好一些，而多抗的親和力會(huì)優(yōu)于單抗，并且特異性并不一定就遜于單抗，主要看抗原的設(shè)計(jì)水平。目前商品化抗體里單抗主要是鼠單抗、兔單抗，多抗主要是兔多抗、山羊多抗等，其他種屬來(lái)源抗體較少。不建議糾結(jié)于單抗好還是多抗好，能做出實(shí)驗(yàn)的抗體就是好抗體。在選擇上一般建議實(shí)驗(yàn)種屬和抗體種屬親緣性越遠(yuǎn)越好，不宜同源。抗體不同種屬會(huì)要影響接下來(lái)二抗的選配。特別是在免疫熒光雙標(biāo)實(shí)驗(yàn)中，需要在區(qū)別于實(shí)驗(yàn)種屬的基礎(chǔ)上，區(qū)分開(kāi)兩個(gè)指標(biāo)的抗體種屬來(lái)源，以便于二抗區(qū)別識(shí)別。

    三、關(guān)于性價(jià)比的選擇：抗體的品質(zhì)高低zui終還是需要通過(guò)實(shí)驗(yàn)結(jié)果來(lái)呈現(xiàn)的，但是在選擇抗體之前我們并無(wú)法準(zhǔn)確判斷抗體的效果如何。無(wú)論什么品牌的，無(wú)論進(jìn)口還是國(guó)產(chǎn)的，都會(huì)有用得不錯(cuò)的產(chǎn)品，也都會(huì)有做不出來(lái)的產(chǎn)品?？贵w屬于異質(zhì)化產(chǎn)品，不同品牌之間，甚至同一品牌的不同產(chǎn)品之間，抗體品質(zhì)差異都較為明顯，而且沒(méi)有統(tǒng)一的衡量標(biāo)準(zhǔn)。這是抗體選擇中zui難的一個(gè)問(wèn)題。很多人習(xí)慣于根據(jù)實(shí)驗(yàn)室傳統(tǒng)意識(shí)或參考文獻(xiàn)上使用的產(chǎn)品進(jìn)行選擇，但是因?yàn)椴煌伍g的抗體效果也是有差異的，所以并不能*確保正確選擇。在這種情況下，抗體的售后就尤為重要，遇到抗體品質(zhì)障礙時(shí)，能夠確保有效地解決問(wèn)題，不至于影響實(shí)驗(yàn)的進(jìn)展。現(xiàn)在有部分品牌可以提供免費(fèi)的抗體小樣的，無(wú)疑對(duì)這個(gè)問(wèn)題是一個(gè)很好的解決方案。先確定抗體是否適合自己的實(shí)驗(yàn)，可以避免因?yàn)榭贵w質(zhì)量投訴耽誤實(shí)驗(yàn)安排。在價(jià)格方面，需要謹(jǐn)記，zui貴的不一定就是的，你的實(shí)驗(yàn)的才是的?；ê芏噱X(qián)買(mǎi)到很貴的抗體，再花上很長(zhǎng)的時(shí)間去投訴的情況并不少見(jiàn)。只買(mǎi)對(duì)的，不買(mǎi)貴的。在選擇價(jià)格的時(shí)候還要注意規(guī)格大小、抗體濃度、效價(jià)范圍等，要綜合考慮。在規(guī)格方面，根據(jù)zui終可以稀釋成的工作液的量的來(lái)衡量更為準(zhǔn)確。很多老品牌提供的抗體產(chǎn)品基本都是以大包裝為主，就單個(gè)課題的實(shí)驗(yàn)而言，過(guò)大的包裝有時(shí)會(huì)造成很大的浪費(fèi)。目前Proteintech、Bioworld、CellSignal等品牌都相繼推出小包裝的抗體，這在一定程度上給選擇者更大的選擇自由度，可以根據(jù)使用產(chǎn)品的效價(jià)，計(jì)算出自己實(shí)際需要的抗體量，做到定量采購(gòu)。四、關(guān)于品牌的選擇：因?yàn)榭贵w品質(zhì)的異質(zhì)化，關(guān)于抗體的品牌選擇就被大家所重視，但是不管是什么品牌都難免會(huì)遇到不適合自己實(shí)驗(yàn)的抗體。所以一般建議考慮那些業(yè)內(nèi)普遍認(rèn)可、購(gòu)買(mǎi)方便、專(zhuān)業(yè)、售后處理便捷的品牌。一些甚至都沒(méi)有正式代理的，只能備選。同時(shí)購(gòu)買(mǎi)時(shí)一定要找能夠提供產(chǎn)品指導(dǎo)、實(shí)驗(yàn)分析、售后處理的正規(guī)代理商購(gòu)買(mǎi)，避免因?yàn)橘I(mǎi)到假貨水貨影響實(shí)驗(yàn)。

    五、關(guān)于其他一些小細(xì)節(jié)：抗體選擇與使用過(guò)程中，多少還會(huì)遇到一些意想不到的事情。有些細(xì)節(jié)，還是需要多注意一些。如在選擇做阻斷或中和實(shí)驗(yàn)時(shí)，有時(shí)需要將抗體加到細(xì)胞培養(yǎng)液中，這是需要注意抗體是否含有疊氮鈉。如果是大包裝的抗體，進(jìn)行分裝是比較節(jié)約的方式，如果是價(jià)的，可以配成母液再分裝。抗體的短時(shí)間運(yùn)輸，用普通冰塊保持溫度是可以滿足要求的。另外不要糾結(jié)于WB過(guò)程中分子量的問(wèn)題。很多時(shí)候，我們看到同樣的抗體，不同的品牌，甚至同一品牌不同的貨號(hào)，標(biāo)注的分子量都不一樣。其實(shí)可能只是生產(chǎn)商只檢測(cè)時(shí)使用了不同的種屬不同的樣品類(lèi)型，或是參照了不同的文獻(xiàn)，對(duì)使用者來(lái)說(shuō)，同樣的樣品，不管使用哪個(gè)品牌的，只要抗體是對(duì)的，目的條帶只會(huì)出現(xiàn)在相同的位置。關(guān)于分子量的問(wèn)題，一般不建議看產(chǎn)品說(shuō)明，WB中條帶的位置由樣品決定，并不會(huì)因?yàn)榭贵w不同而不同。所以在檢測(cè)蛋白之前，我們可以通過(guò)數(shù)據(jù)庫(kù)或參考文獻(xiàn)，對(duì)將要檢測(cè)的蛋白做個(gè)比較全面的了解，包括其可能剪切與修飾的情況、表型的情況等。在*次使用一個(gè)新的抗體時(shí)，不要根據(jù)分子量橫向剪膜，可以保留幾個(gè)全泳道，看看條帶位置或分布的情況。