經(jīng)常有用戶反映“細(xì)胞凍存與復(fù)蘇遇到了問題”，“如何握住原力，讓你的細(xì)胞乖乖沉睡又滿血復(fù)活？”

遠(yuǎn)慕生物為此做了以下總結(jié)：

選 好 細(xì) 胞 凍 存 液 是 基 礎(chǔ)

使用動物血清常常會遇到很多問題，例如：病毒感染、其他動物源的污染。使用無血清制品培養(yǎng)與凍存細(xì)胞，可以消除這方面的隱患。此外，無血清凍存液可以確保細(xì)胞在化學(xué)成分固定的條件下生長，更進(jìn)一步確保細(xì)胞凍存時(shí)的條件穩(wěn)定。
 

慢 慢 做 冷 凍

若您養(yǎng)的是貼壁細(xì)胞，請先將細(xì)胞消化下來；若是懸浮細(xì)胞，請直接按以下步驟進(jìn)行：

1. 以200-300g離心3分鐘，棄去上清，收集細(xì)胞。

2. 用BI無血清凍存液將細(xì)胞重懸（不需回溫），將細(xì)胞密度調(diào)整為3~5x106 cells/ml，添加到凍存管中（一般每管1ml）。

3. 建議將含有細(xì)胞懸液的凍存管放進(jìn)漸進(jìn)降溫盒或是保溫杯中，置于-80°C冰箱6小時(shí)以上或是過夜（或不需要程序降溫)。

4. 將凍存管迅速移到液態(tài)氮中保存。

5. 凍存24小時(shí)后，建議檢測細(xì)胞存活率。

細(xì) 胞 復(fù) 蘇 要 迅 速

1. 將細(xì)胞凍存管由液態(tài)氮中取出，置于室溫回溫，不用水浴溶解。此時(shí)可準(zhǔn)備新鮮培養(yǎng) 基、無菌15ml離心管、培養(yǎng)瓶。

2. 在生物安全柜內(nèi)，直接以少量培養(yǎng)基反復(fù)沖融，使細(xì)胞團(tuán)塊化凍。

3. 先在無菌15ml離心管中加入5ml培養(yǎng)基，再將化凍的細(xì)胞懸液加入離心管中。以200~300g，3分鐘離心收集細(xì)胞。

4. 倒去上清液，重懸細(xì)胞，移到培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。

BI無血清細(xì)胞凍存液

不含動物成份

細(xì)胞凍存與復(fù)蘇后，平均活細(xì)胞回收比例超過90%

Serum-Free Cell Freezing Medium

無血清細(xì)胞凍存液，無血清培養(yǎng)的細(xì)胞應(yīng)該使用無血清的凍存液保存，以保持無血清培養(yǎng)體系的完整。本凍存液不含蛋白及動物組分，主要成分為DMSO和甲基纖維素。

Cryostem ACF Freezing Media

無血清干細(xì)胞凍存液（Optimized for Stem Cell），CryoStem對所有種類的細(xì)胞都有非常好的凍存效果，該產(chǎn)品經(jīng)過驗(yàn)證，特別適用于人胚胎干細(xì)胞和人原代細(xì)胞的凍存。用CryoStem凍存融解后，細(xì)胞表現(xiàn)出ji佳的復(fù)蘇率、生長活性、貼壁性和傳代能力。

MSC Freezing Medium

無血清間充質(zhì)干細(xì)胞凍存液，即用型溶液，特別適用于人類間充質(zhì)干細(xì)胞凍存，用MSC凍存液凍存融解后，細(xì)胞表現(xiàn)出ji佳的復(fù)蘇率、生長活性。