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細(xì)胞培養(yǎng)基的分類與選擇技術(shù)總結(jié)
點(diǎn)擊次數(shù):1281 更新時(shí)間:2020-06-19

培養(yǎng)基是用來(lái)供給細(xì)胞營(yíng)養(yǎng),促使細(xì)胞增殖的,也是細(xì)胞賴以生長(zhǎng)的環(huán)境。細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中用量多的就是細(xì)胞培養(yǎng)基,雖然細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)基本技術(shù)大同小異,但是每種細(xì)胞的培養(yǎng)條件卻相差甚遠(yuǎn)。若偏離某種細(xì)胞所需的培養(yǎng)條件,則會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞表達(dá)不同的表型。

 

 

培養(yǎng)基種類

按照來(lái)源分類:在動(dòng)物細(xì)胞體外培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中,可使用天然培養(yǎng)基(Natural Medium)或是合成培養(yǎng)基(Synthetic/Artificial Medium)。

天然培養(yǎng)基:源于動(dòng)物體液或組織分離提取,營(yíng)養(yǎng)成分豐富且各項(xiàng)條件與體內(nèi)環(huán)境相似,所以培養(yǎng)效果佳,但是由于來(lái)源于動(dòng)物,成分復(fù)雜,且批間差較大。

合成培養(yǎng)基:是由高純度化學(xué)成分(無(wú)機(jī)鹽、氨基酸、維生素、含碳物質(zhì)等)與純水配置而成,所有成分都是確定,且可知其確切含量的。

合成培養(yǎng)基根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康挠挚煞譃槿N:

★ 短時(shí)間保存細(xì)胞活性

即各類平衡鹽溶液,具有特定的pH和滲透壓;能維持細(xì)胞離開(kāi)生物體后幾小時(shí)內(nèi)的活性。

★ 延長(zhǎng)細(xì)胞存活時(shí)間

即基礎(chǔ)培養(yǎng)基,在平衡鹽溶液中添加各種有機(jī)化合物或血清,配合適當(dāng)?shù)膶?shí)驗(yàn)操作條件,可將細(xì)胞培養(yǎng)至多代。

★ 特殊功能

即特殊培養(yǎng)基,根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康?誘導(dǎo)分化、增殖等要求,將基礎(chǔ)培養(yǎng)基額外添加各類因子的特殊培養(yǎng)基。

目前市面上合成培養(yǎng)基種類繁多且使用便利,因此合成培養(yǎng)基目前是使用guang泛的。

培養(yǎng)基一般含有氨基酸、無(wú)機(jī)鹽、維生素、含碳物質(zhì)和其他營(yíng)養(yǎng)元素,每種成分對(duì)于細(xì)胞存活、代謝等功能都有不同影響,不同細(xì)胞系需要的成分含量也不同,因此市面上會(huì)存在各類培養(yǎng)基配方。

培養(yǎng)基形式不同,儲(chǔ)存體積、價(jià)格、使用方式也各不相同。

因培養(yǎng)基種類繁多,因此,我們簡(jiǎn)單列舉了幾種常見(jiàn)基礎(chǔ)培養(yǎng)基為大家進(jìn)行介紹

1. MEM

Minimal Essential Medium是基本的培養(yǎng)基, 設(shè)計(jì)之初是為了培養(yǎng)HeLa細(xì)胞以及部分哺乳類的成纖維細(xì)胞。MEM含有12種必需氨基酸、谷氨酰胺和8種維生素,適合多種細(xì)胞單層生長(zhǎng)。以MEM為基礎(chǔ),Stanner利用Earle's Balanced Salts和非必需胺基酸(NEAA)進(jìn)一步配制成MEM-Alpha培養(yǎng)基,可廣泛用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)。

2. DMEM

Dulbecco's Modified Eagle Medium(DMEM)是目前chang使用的改良式Eagle's培養(yǎng)基。DMEM與MEM含有相同的營(yíng)養(yǎng)成分,但濃度高出2~4倍。主要用于快速生長(zhǎng)的細(xì)胞,分低糖(1000mg/L)、高糖(4500mg/L)兩種。DMEM含更高濃度的NaHCO3,要用10%的CO?來(lái)平衡,當(dāng)然也可以在較低CO?濃度下使用。

DMEM-高糖(標(biāo)準(zhǔn)型)更適合高密度懸浮細(xì)胞培養(yǎng)。適用于附著性較差,但又不希望它脫離原來(lái)生長(zhǎng)點(diǎn)的克隆培養(yǎng),也可用于雜交瘤中骨髓瘤細(xì)胞和DNA轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)化細(xì)胞的培養(yǎng)。

DMEM-低糖(標(biāo)準(zhǔn)型)適于依賴性貼壁細(xì)胞培養(yǎng),特別適用于生長(zhǎng)速度快、附著性較差的腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)。

3. RPMI-1640

RPMI-1640營(yíng)養(yǎng)成分比較簡(jiǎn)單,比DMEM少一點(diǎn)糖和谷光甘肽,廣泛應(yīng)用于許多種正常細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞、特殊造血細(xì)胞、正常或惡性增生的白細(xì)胞,雜交瘤細(xì)胞的培養(yǎng)。其它像K-562、HL-60、Jurkat、Daudi、IM-9等成淋巴細(xì)胞、T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞以及HCT-15上皮細(xì)胞等均可參考使用。

4. DMEM:F12

F12培養(yǎng)基成分豐富,含有多種微量元素,和DMEM以1:1結(jié)合,稱為DMEM:F12培養(yǎng)基,作為無(wú)血清培養(yǎng)基的基礎(chǔ),以利用了F12含有較豐富的成分和DMEM含有較高濃度的營(yíng)養(yǎng)成分為優(yōu)點(diǎn)。

該培養(yǎng)基適用于血清含量較低條件下哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)。為了增強(qiáng)該培養(yǎng)基的緩沖能力,可以在DMEM:F12(1:1)中加入15mMHEPES緩沖液。

5. McCoy's 5A

McCoy's 5A Medium早是用于肉瘤細(xì)胞的培養(yǎng)所設(shè)計(jì),可支持多種(如骨髓、皮膚、肺和脾臟等)的原代細(xì)胞的生長(zhǎng)。除適于一般的原代細(xì)胞培養(yǎng)外,主要用于作組織活檢培養(yǎng)、一些淋巴細(xì)胞培養(yǎng)以及一些難培養(yǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)支持。

6. M-199

M-199培養(yǎng)基由Morgan等人研制,是第一個(gè)具有確定化學(xué)成分的細(xì)胞培養(yǎng)液,原本是用來(lái)研究雞胚原代細(xì)胞。除BSS外,含有53種成分,為全面培養(yǎng)基,此培養(yǎng)液必須輔以血清才能支持長(zhǎng)期培養(yǎng)。主要用于雞胚成纖維細(xì)胞培養(yǎng)。M-199可用于培養(yǎng)多種種屬來(lái)源的細(xì)胞,并能培養(yǎng)轉(zhuǎn)染的細(xì)胞,廣泛用于病毒學(xué)、疫苗生產(chǎn)。

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